DNA खंड का पृथक्करण तथा विलगन (Separation and Isolation of DNA fragments) :-
प्रतिबंधन एंडोन्यूक्लिएज द्वारा DNA को काटने के बाद उसका खंडन हो जाता है। इन खण्डों को जेल इलेक्ट्रोफॉरेसिस तकनीक द्वारा अलग करते हैं।
- डीएनए खंड ऋण आवेशित (negative charged) अणु होते हैं, इसलिए इन्हें इलेक्ट्रिक फील्ड में माध्यम या matrix द्वारा एनोड (धनावेश) की ओर बलपूर्वक भेज कर अलग करते हैं।
- माध्यम या matrix के रूप में ऐगारोज का प्रयोग करते हैं, जो समुद्री घास से प्राप्त किया गया एक प्राकृतिक बहुलक (polymer) है।
- डीएनए खंड को ऐगारोज जेल द्वारा छोटे – बड़े size के अनुसार अलग करते हैं। छोटे खंड अधिक दूरी तक गति कर जाते हैं।
- अलग हुए डीएनए खंड को देखने के लिए उन्हें इथिडियम ब्रोमाइड नामक यौगिक से अभिरंजीत (strain) करने के बाद पराबैंगनी – विकिरण (UV – radiation) डालते हैं तब DNA के चमकीली नारंगी रंग की पट्टी दिखाई पड़ती है।
चित्र :- जेल इलेक्ट्रोफॉरेसिस द्वारा DNA खंड का पृथक्करण।
- डीएनए के पृथक्कृत पट्टियों को ऐगारोज से कटकर निकलते हैं तथा जेल के टुकड़ों से एक्सट्रैक्ट कर लेते हैं।